賽默飛世爾科技的QuantStudio™ 3實(shí)時(shí)熒光定量PCR系統(tǒng)是一款經(jīng)典的96孔基礎(chǔ)型qPCR儀，其耗材和試劑選擇非常成熟和廣泛。總的來(lái)說(shuō)，您需要準(zhǔn)備以下幾大類：

一、賽默飛QuantStudio3實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心耗材

1、反應(yīng)板/板膜組合

QuantStudio 3是96孔標(biāo)準(zhǔn)模塊，因此您需要選擇96孔的板子和對(duì)應(yīng)的密封膜。賽默飛提供了多種選擇以適應(yīng)不同的實(shí)驗(yàn)需求和預(yù)算：

（1）微孔板：

標(biāo)準(zhǔn)96孔板： 常用的類型，例如 MicroAmp™ Fast Optical 96-Well Reaction Plate (貨號(hào)： 4346906)。

光學(xué)級(jí)96孔板： 確保良好的光學(xué)性能，減少信號(hào)交叉干擾。

（2）密封膜：

光學(xué)平蓋膜： 與大多數(shù)試劑兼容，需要專用的壓膜工具密封，密封性好。例如 MicroAmp™ Optical Adhesive Film (貨號(hào)： 4311971)。

八聯(lián)管蓋： 如果您使用八聯(lián)管，則需要匹配的管蓋。例如 MicroAmp™ Optical 8-Cap Strip (貨號(hào)： 4323032)。八聯(lián)管的好處是可以在部分孔中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，靈活性高。

二、賽默飛QuantStudio3實(shí)時(shí)熒光定量PCR核心試劑

qPCR試劑是反應(yīng)發(fā)生的化學(xué)基礎(chǔ)，主要分為兩大類：染料法和探針?lè)ā?/span>

1、預(yù)混液

這是常用、方便的形式，已將DNA聚合酶、dNTPs、緩沖液等組分預(yù)先混合好，用戶只需加入引物、模板和水即可。

（1）SYBR Green法（染料法）：

PowerUp™ SYBR™ Green Master Mix (貨號(hào)： A25742)： 性能優(yōu)異，含有ROX染料校正，適合大多數(shù)應(yīng)用。

SYBR™ Green PCR Master Mix： 經(jīng)典選擇。

特點(diǎn)： 經(jīng)濟(jì)、通用性強(qiáng)，但特異性略低于探針?lè)ǎ枰浜先劢馇€分析來(lái)確認(rèn)產(chǎn)物的單一性。

（2）TaqMan法（探針?lè)ǎ?/span>

TaqMan™ Fast Advanced Master Mix (貨號(hào)： 4444557)： 快速、靈敏，是進(jìn)行探針?lè)╭PCR的重要選擇。

特點(diǎn)： 特異性高，適用于多重檢測(cè)（同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)基因），但成本較高，需要針對(duì)特定基因序列設(shè)計(jì)并合成探針。

2、關(guān)鍵組分

如果您不使用預(yù)混液，則需要自行配制體系，包括：

熱啟動(dòng)Taq DNA聚合酶

dNTPs

緩沖液

鎂離子

熒光染料 或 探針

對(duì)于絕大多數(shù)用戶，直接購(gòu)買預(yù)混液是高效、可靠的選擇。

三、其他輔助耗材與試劑

1、樣品制備階段：

（1）RNA/DNA提取試劑盒： 如 Invitrogen™ PureLink™ 系列。

（2）無(wú)核酸酶水： 用于稀釋和配制反應(yīng)體系。

（3）RNase抑制劑： 如果進(jìn)行RT-qPCR，用于防止RNA降解。

2、液體操作：

（1）無(wú)濾芯吸頭： 用于移取模板、引物等。

（2）帶濾芯吸頭： 強(qiáng)烈推薦用于移取預(yù)混液，可防止氣溶膠污染和交叉污染。

（3）PCR管/板： 用于配制主混合物。

3、逆轉(zhuǎn)錄試劑（用于RT-qPCR）：

如果您是從RNA開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，需要先將RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。例如 SuperScript™ IV First-Strand Synthesis System。

四、總結(jié)與工作流程示例

一個(gè)典型的SYBR Green RT-qPCR實(shí)驗(yàn)流程所需清單如下：

1、RNA提取： RNA提取試劑盒、無(wú)RNase的離心管和吸頭。

2、逆轉(zhuǎn)錄： 逆轉(zhuǎn)錄酶、隨機(jī)引物/ Oligo dT、dNTPs、RNase抑制劑、無(wú)核酸酶水。

3、qPCR反應(yīng)體系配制：

（1）試劑： PowerUp? SYBR? Green Master Mix、基因特異性引物、無(wú)核酸酶水、cDNA模板。

（2）耗材： 96孔反應(yīng)板、光學(xué)粘封膜、帶濾芯的吸頭、用于配制主混合物的離心管。

4、上機(jī)運(yùn)行： 將密封好的反應(yīng)板放入QuantStudio 3中，設(shè)置程序并運(yùn)行。