Eppendorf 5425是一款非常經(jīng)典且高性能的微量高速冷凍離心機(jī)，其MAX 轉(zhuǎn)速可達(dá)14,700 rpm（約21,130 x g），廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)和臨床診斷等領(lǐng)域。它的主要特點(diǎn)是體積緊湊、運(yùn)行安靜、制冷快速且控溫精準(zhǔn)。以下是一些典型的使用案例介紹，您可以根據(jù)這些案例來理解它適合在哪些實(shí)驗(yàn)步驟中發(fā)揮作用。

一、艾本德5425臺(tái)式微量離心機(jī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

這是5425最核心的應(yīng)用領(lǐng)域。

1、質(zhì)粒DNA提取

（1）步驟：在堿裂解法提取質(zhì)粒的多個(gè)步驟中都需要離心。

（2）具體操作：

菌體收集：取1-2 mL過夜培養(yǎng)的菌液，使用1.5 mL或2.0 mL離心管，在8,000 - 12,000 rpm條件下離心1分鐘，棄上清，收集菌體。

沉淀雜質(zhì)：在加入溶液II和溶液III后，會(huì)產(chǎn)生蛋白質(zhì)和基因組DNA的沉淀。此時(shí)需要12,000 - 14,000 rpm離心5-10分鐘，將沉淀緊密壓在管底，以便將上清液（含質(zhì)粒DNA）轉(zhuǎn)移到新的離心管中。

沉淀DNA：在上清中加入異丙醇或乙醇沉淀質(zhì)粒DNA時(shí)，需要在4°C預(yù)冷條件下，以MAX 轉(zhuǎn)速（如14,000 rpm）離心15-30分鐘，以確保微量的DNA能被沉淀下來。

（3）為何需要5425：步驟多，需要頻繁離心；沉淀DNA時(shí)需要高速和冷凍功能以防止樣品過熱并提高沉淀效率。

2、RNA/DNA純化

（1）步驟：使用商品化試劑盒（如Qiagen, Thermo Fisher的系列產(chǎn)品）進(jìn)行核酸純化時(shí)。

（2）具體操作：在結(jié)合、洗滌步驟中，通常需要短時(shí)高速離心（如12,000 rpm， 30-60秒），將液體甩過純化柱。洗脫時(shí)，為回收率，有時(shí)也會(huì)進(jìn)行短暫高速離心。

（3）為何需要5425：快速、高效的離心能確保液體通過膜，避免殘留，保證純化和回收效率。

3、PCR產(chǎn)物純化、酶切反應(yīng)后處理

（1）步驟：在PCR反應(yīng)后或酶切反應(yīng)后，可能需要去除多余的引物、dNTPs或酶等。

（2）具體操作：使用純化試劑盒時(shí)，離心步驟與上述RNA/DNA純化類似。簡(jiǎn)單沉淀蛋白質(zhì)時(shí)，可能需要4°C， 14,000 rpm離心10分鐘。

二、艾本德5425R冷凍離心機(jī)蛋白組學(xué)與生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、細(xì)胞/組織裂解物中沉淀蛋白質(zhì)或細(xì)胞碎片

（1）步驟：在提取總蛋白時(shí)，需要將細(xì)胞裂解液中的不溶物（如細(xì)胞膜、核酸等）去除。

（2）具體操作：將裂解后的樣品在4°C條件下，以12,000 - 14,000 rpm離心15-20分鐘。上清即為可溶性總蛋白，沉淀?xiàng)壢ァ?/span>

（3）為何需要5425：低溫控制至關(guān)重要，可以防止蛋白質(zhì)在離心過程中降解或變性。5425的快速制冷能迅速將轉(zhuǎn)子降溫至4°C。

2、免疫沉淀/共沉淀后的珠子清洗

（1）步驟：在免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中，需要多次洗滌結(jié)合了抗原-抗體復(fù)合物的Protein A/G珠子。

（2）具體操作：每次加入洗滌緩沖液后，需要進(jìn)行短時(shí)低速離心（如3,000 - 5,000 rpm， 30秒），使珠子沉降到管底，然后小心吸棄上清。

（3）為何需要5425：雖然轉(zhuǎn)速不高，但需要離心機(jī)運(yùn)行平穩(wěn)，防止將松散的珠子沉淀重新打散。5425的加速和減速曲線平滑，非常適合此類操作。

三、常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)

1、細(xì)胞傳代培養(yǎng)

（1）步驟：消化下來的細(xì)胞需要離心收集并重懸。

（2）具體操作：將含有細(xì)胞的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入15 mL錐形離心管（需配用15 mL轉(zhuǎn)接器），在室溫或4°C條件下，以1,000 - 1,500 rpm離心5分鐘，使細(xì)胞溫和地沉淀下來，棄去上清（含胰酶等），加入新鮮培養(yǎng)基重懸。

（3）為何需要5425：對(duì)于貼壁細(xì)胞，離心力不能過大，否則會(huì)損傷細(xì)胞。5425可以精確設(shè)置較低的轉(zhuǎn)速，并且運(yùn)行非常平穩(wěn)，對(duì)細(xì)胞友好。

2、收集細(xì)胞沉淀用于后續(xù)分析

（1）步驟：需要提取細(xì)胞內(nèi)的核酸或蛋白時(shí)，先離心收集細(xì)胞。

（3）具體操作：取少量細(xì)胞懸液，使用1.5/2.0 mL離心管，在4°C條件下，3,000 - 5,000 rpm離心5分鐘，棄上清，得到細(xì)胞沉淀。

四、總結(jié)與關(guān)鍵特性

1、通過以上案例，我們可以總結(jié)出Eppendorf 5425離心機(jī)的核心優(yōu)勢(shì)：

2、高速與高離心力：能應(yīng)對(duì)絕大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的沉淀需求。

3、精確的溫控：制冷功能是保證對(duì)溫度敏感樣品（如RNA、蛋白質(zhì)）活性的關(guān)鍵。

4、多功能性與兼容性：通過搭配不同的轉(zhuǎn)子和適配器，可以處理從0.2 mL PCR管到15 mL錐形離心管的各種規(guī)格樣品。

5、操作便捷與人性化設(shè)計(jì)：快速的升/降速、Short-Spin功能、安靜的運(yùn)行噪音，都大大提升了實(shí)驗(yàn)效率和舒適度。