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公司新聞

賽默飛Qubit4.0熒光計的使用誤區及解決方案

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   賽默飛Qebit4.0熒光計作為一款高靈敏度的核酸和蛋白定量儀器,在分子生物學實驗室中應用廣泛。然而,在實際操作過程中,許多用戶常因對儀器原理理解不足或操作不規范而導致結果偏差。本文將系統分析Qebit4.0使用中的常見誤區,并提供相應的解決方案,幫助科研人員獲得更準確可靠的定量數據。
 
  一、標準曲線制備誤區
 
  誤區表現:許多用戶誤以為標準曲線只需做一次便可長期使用,或在不同批次實驗中混用同一標準曲線。
 
  問題分析:Qebit試劑對環境條件敏感,不同批次的染料可能存在活性差異,溫度變化也會影響熒光信號。使用過期或不匹配的標準曲線會導致顯著的定量誤差。
 
  解決方案:
 
  1.每次實驗都必須使用配套試劑新鮮制備標準曲線
 
  2.標準品應與待測樣品同批次處理,避免時間差影響
 
  3.標準曲線至少包含兩個濃度點(如0ng/μL和10ng/μL),高精度實驗建議增加中間點
 
  4.記錄每次標準曲線的斜率和R²值,確保在0.98-1.2范圍內
 
  二、樣品制備與加樣誤差
 
  誤區表現:用戶常忽視樣品與工作液的混合比例,或使用不準確的加樣方法。
 
  問題分析:Qebit檢測基于熒光染料與核酸的特異性結合,比例不當會導致信號飽和或不足。常見的加樣誤差包括氣泡產生、管壁掛液和體積不準確。
 
  解決方案:
 
  1.嚴格遵循200:1的工作液與樣品比例(如199μl工作液+1μl樣品)
 
  2.使用校準過的低吸附移液器及匹配槍頭
 
  3.加樣時槍頭接觸管壁緩慢釋放,避免氣泡產生
 
  4.混合后離心5秒,確保溶液集中于管底
 
  5.高濃度樣品應先稀釋后檢測,避免超出線性范圍
 
  三、儀器操作與校準問題
 
  誤區表現:忽略儀器預熱和校準步驟,或錯誤理解校準的意義。
 
  問題分析:Qebit4.0的光學系統需要穩定時間,冷啟動直接測量會導致讀數波動。校準并非簡單的"調零",而是建立光學基準。
 
  解決方案:
 
  1.開機后至少預熱10分鐘再進行測量
 
  2.每次更換試劑類型或長時間停用后需執行校準
 
  3.使用原廠提供的校準管,避免第三方耗材
 
  4.校準失敗時檢查比色皿是否清潔、有無劃痕
 
  5.定期(每季度)進行工廠級校準維護
 
  四、數據解讀誤區
 
  誤區表現:盲目信任儀器顯示值,忽略質量控制參數;對異常結果不做驗證。
 
  問題分析:Qebit讀數受多種因素影響,包括樣品純度、溫度漂移、光路污染等。僅關注主數值而忽略QualityIndex(QI)等參數可能導致錯誤結論。
 
  解決方案:
 
  1.首先檢查QI值,>0.95為可信,<0.7需重新檢測
 
  2.異常高/低值應通過稀釋復測驗證
 
  3.對比260/280比值(使用QebitRNA/DNAHS試劑時)
 
  4.建立實驗室內部質控標準,記錄歷史數據趨勢
 
  5.關鍵樣本建議平行檢測3次取平均值
 
  五、維護與存儲不當
 
  誤區表現:長期不清潔檢測倉,試劑保存條件不當,忽略環境影響因素。
 
  問題分析:灰塵積累會散射激發光,試劑降解導致靈敏度下降,環境溫度波動引起讀數漂移。
 
  解決方案:
 
  1.每周用無塵棉簽清潔樣品倉
 
  2.工作液避光保存于4℃,長期不用置于-20℃
 
  3.維持實驗室溫度在18-25℃,相對濕度<80%
 
  4.每月用70%乙醇清潔儀器表面,避免腐蝕性溶劑
 
  5.每年更換一次儀器內部的干燥劑

TEL:18016231680

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